薄層色譜TLC實(shí)驗(yàn)操作程序及其基本技術(shù)

1.薄層色譜TLC的制備：分軟板和硬板兩種。鋪板，一般取一份吸附劑加兩份水，研磨調(diào)成糊狀，涂布，厚度一般為0.3-0.5nm，一塊5×20cm板約需3g吸附劑。室溫下晾干，于105－110℃活化0.5-1小時(shí)，置干燥器內(nèi)備用，1周內(nèi)可使用，超出1周，用前需再次活化，不主張反復(fù)活化，長(zhǎng)期使用。  

2.供試品溶液的制備：按規(guī)定的方法制備。

3.對(duì)照品溶液及對(duì)照藥材溶液的制備：按規(guī)定的方法制備。  

4.點(diǎn)樣  

(1).直接點(diǎn)樣法：點(diǎn)樣量一般不超過(guò)10ul，點(diǎn)樣時(shí)不要損傷薄層板表面，宜分次點(diǎn)加，直徑不要超過(guò)4mm，點(diǎn)樣基線距底邊為1.0-1.5cm，距兩邊不少于1.0cm，兩個(gè)樣點(diǎn)距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散以不影響檢出為宜，一般為1.5-2.0cm，點(diǎn)樣基線與薄層板地邊平行。  

(2).濾紙移樣法：薄層板上打孔，另取大小相同的濾紙，置針尖上，點(diǎn)樣，將濾紙置挖好的小孔上，要求吻合良好。  

5.展開(kāi)劑的制備：按比例配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。  

6.層析缸的飽和：為使Rf值重現(xiàn)性良好，展開(kāi)劑置于層析缸中，缸壁貼上兩條高、寬適宜的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封室頂?shù)纳w，室溫放置1小時(shí)左右，俟展開(kāi)劑揮發(fā)，使系統(tǒng)平衡。  

7.薄層板的預(yù)飽和：克服邊緣效應(yīng)以及改善分離效果，Rf值重現(xiàn)性良好。  

8.展開(kāi)：水平展開(kāi)和垂直展開(kāi)，浸入深度距底邊0.5－1.0cm，距原點(diǎn)5mm為宜，切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中，展距以7－15cm為宜，展距過(guò)大，斑點(diǎn)擴(kuò)散，度差，展距過(guò)小，分離效果差。  

9.顯色

(1).蒸氣顯色法：常用揮發(fā)性的酸、堿如鹽酸、硝酸、濃氨、二乙胺等蒸氣顯色。

(2).試劑顯色法：常用噴霧法或浸漬法處理，顯色試劑常用硫酸、碘的氯仿溶液、堿性高錳酸鉀溶液、磷鉬酸等。10.色譜的檢視

(1).有色物質(zhì)：日光下直接觀察或在紫外燈下觀察熒光斑點(diǎn)。

(2).無(wú)色物質(zhì)：

1）在紫外燈下（波長(zhǎng)）下觀察化合物本身不同顏色的暗斑或熒光斑點(diǎn)，或顯色后按有色物質(zhì)進(jìn)行檢視；

2）在可見(jiàn)光、紫外光下均不顯示，也沒(méi)有合適的顯色方法的物質(zhì)，可在紫外光燈254nm下觀察熒光薄層板上黃色熒光背景上的紫藍(lán)色斑點(diǎn)，這是由于化合物減弱了吸附劑中熒光物質(zhì)的紫外吸收強(qiáng)度引起了熒光的熄滅所致。