食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變?cè)蓄伾氖称诽砑觿?，又稱(chēng)食用染料和著色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著色劑因色澤鮮艷，著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、價(jià)格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。靛藍(lán)是食品生產(chǎn)中常用的合成著色劑之一，關(guān)于靛藍(lán)的分析測(cè)試，有實(shí)驗(yàn)員反饋回收率做不好，時(shí)高時(shí)低，事實(shí)真是這樣嗎，我們一起來(lái)揭秘真相！

本文所指的靛藍(lán)，CAS：860-22-0。因許多著色劑中文俗稱(chēng)一樣，在選擇標(biāo)準(zhǔn)品的時(shí)候容易弄錯(cuò)，比如CAS：860-22-0與CAS：482-89-3的著色劑，生活中習(xí)慣均稱(chēng)之為靛藍(lán)，但兩者結(jié)構(gòu)式是不一樣的，CAS：860-22-0的靛藍(lán)可以溶于水，而CAS：482-89-3的靛藍(lán)不溶于水。

CAS：860-22-0

CAS：482-89-3

實(shí)驗(yàn)部分

SPE

小柱：聚酰胺小柱500mg/6mL

活化：5mL甲醇

平衡：5mL 水

上樣：5mL 1ppm靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品，溶劑檸檬酸溶液（pH 3.0~4.0）

淋洗：5mL 甲醇：甲酸：去離子水（4：2：4）（V/V/V），淋洗后抽干小柱中的溶液。

洗脫：3mL*2 10%氨水甲醇

收集洗脫液，并于50℃氮吹至干，用甲醇：0.02M乙酸銨溶液（1:1）定容至1mL，充分溶解后，上機(jī)分析。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動(dòng)相：A:甲醇  B：乙酸銨(0.02mol/L)

梯度洗脫：0min 15%A，5min 35% A，12~22min 95%A，22.5~30min 15 %A

流速：1.0mL/min

柱溫：25℃

波長(zhǎng)：254nm

進(jìn)樣量：10uL

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

靛藍(lán)的加標(biāo)回收率在60~100%，不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間、不同實(shí)驗(yàn)員測(cè)試的結(jié)果不盡相同。

原因分析

那么到底是什么原因?qū)е碌逅{(lán)回收率不穩(wěn)定呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

1 SPE方法

分布收集SPE上樣、淋洗溶液均未檢測(cè)到靛藍(lán)，對(duì)洗脫后的聚酰胺小柱做第二次洗脫，也未檢測(cè)到目標(biāo)物；

降低SPE小柱上樣溶液的濃度至原來(lái)的1/5,并重復(fù)分布收集過(guò)程，洗脫液中靛藍(lán)的回收率依然不穩(wěn)定，忽高忽低；

換用不同材質(zhì)的容器，塑料容器和玻璃容器收集過(guò)柱溶液，排查盛放過(guò)柱溶液的容器是否吸附靛藍(lán)，結(jié)果并無(wú)差異。

經(jīng)過(guò)對(duì)SPE方法的分析，回收率有時(shí)候可以達(dá)到90%以上，可見(jiàn)SPE方法沒(méi)有問(wèn)題。

2 標(biāo)準(zhǔn)品存放條件

配置500ppm/水的靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，室溫存放一段時(shí)間，肉眼觀察其變化情況。可見(jiàn)剛配置好溶液為藍(lán)色，然后顏色不斷變化，放置三周后溶液變成黃色并一直保持這個(gè)顏色，可見(jiàn)靛藍(lán)水溶液在室溫存放穩(wěn)定性不好，分析導(dǎo)致其變質(zhì)的原因可能有溫度、時(shí)間、光照、氧氣等因素。

圖1  500ppm靛藍(lán)水溶液

將500ppm/水的靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配置后4℃保存，在不同的時(shí)間取樣，加水溶解稀釋成5ppm的溶液后，立即上機(jī)測(cè)試，并與新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)、赤蘚紅B其他7種著色劑做對(duì)照，7種著色劑的處理方法與靛藍(lán)相同。8種著色劑峰面積測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表1。由此可見(jiàn)，除了靛藍(lán)之外，其他7種著色劑在相同的保存條件下含量均無(wú)變化，而靛藍(lán)儲(chǔ)備溶液4℃保存時(shí)，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)不斷降解，一個(gè)月后有效成分只有初的66%。即使是同時(shí)配置的靛藍(lán)溶液，光照4h后，有效成分也只有初的83%，光照11h后，有效成分只有初的63%。

實(shí)驗(yàn)方法改進(jìn)

每次實(shí)驗(yàn)均取固體靛藍(lán)標(biāo)品，現(xiàn)用現(xiàn)配，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中避光操作，實(shí)驗(yàn)前處理時(shí)間控制在1天之內(nèi)，樣品處理完后，立即上機(jī)測(cè)試，結(jié)果靛藍(lán)的回收率可以達(dá)到90~95%，RSD<5%。

小編建議

靛藍(lán)（CAS:860-22-0）性質(zhì)很不穩(wěn)定，不耐光和熱，實(shí)驗(yàn)中靛藍(lán)回收率忽高忽低不穩(wěn)定的原因主要是靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)生了降解或者樣品中的靛藍(lán)在前處理過(guò)程中降解，為了避免靛藍(lán)的損失，每次實(shí)驗(yàn)需要用固體的靛藍(lán)標(biāo)品，現(xiàn)用現(xiàn)配，實(shí)驗(yàn)用到的標(biāo)品包括上機(jī)的和加標(biāo)的，需要同時(shí)配置好并在相同的條件下保存，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中避光操作，合理安排前處理時(shí)間，盡可能快的完成前處理，樣品處理完后，立即上機(jī)測(cè)試。