食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變?cè)蓄伾氖称诽砑觿?，又稱食用染料和著色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著色劑因色澤鮮艷，著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、價(jià)格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。

     chang用的食品添加有新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán) 、赤蘚紅等，《GB 5009.35-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》中規(guī)定了這7種合成著色劑的液相分析方法，7種合成著色劑中其中一種著色劑是亮藍(lán)，關(guān)于亮藍(lán)的測(cè)定經(jīng)常聽(tīng)實(shí)驗(yàn)員反饋亮藍(lán)旁邊總是有雜質(zhì)峰，事實(shí)真是這樣嗎？

我們一起來(lái)揭秘真相！

上機(jī)標(biāo)品

準(zhǔn)備亮藍(lán)標(biāo)品， 用水配置成10ppm。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動(dòng)相：A:甲醇B：0.02M乙酸銨

梯度洗脫：0min 20%A，5min 35% A，12~18min 98%A，20~27min 20%A

柱溫：25℃

波長(zhǎng)：254nm

進(jìn)樣量：20ul

流速：1.0ml/min

實(shí)驗(yàn)譜圖

圖1亮藍(lán)色譜圖（色譜條件1）

圖4 亮藍(lán)色譜圖（色譜條件2）

圖5 亮藍(lán)色譜圖（色譜條件3）

結(jié)果分析

扣除溶劑空白后得到的亮藍(lán)譜圖見(jiàn)圖1，果然不是對(duì)稱的色譜峰，而且非但不對(duì)稱，看著還像3個(gè)峰。那么到底是什么原因呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

（1）標(biāo)準(zhǔn)品問(wèn)題。若標(biāo)準(zhǔn)品純度不高，可能會(huì)帶來(lái)雜質(zhì)干擾，查看亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的證書標(biāo)識(shí)的純度是87.6%，純度不是特別高，但是是某進(jìn)口D公司生產(chǎn)的，無(wú)法確定3個(gè)峰里面是否含有雜質(zhì)峰。

（2）光譜特征。紫外-可見(jiàn)吸收光譜是化合物固有的性質(zhì)，一般不同的化合物其吸收特征是不一樣的，因此可以通過(guò)光譜特征對(duì)化合物進(jìn)行定性分析。那么這3個(gè)峰到低是什么物質(zhì)呢，使用DAD檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行200-800nm范圍內(nèi)的掃描，得到的光譜見(jiàn)圖2，由此可見(jiàn)3個(gè)化合物的紫外吸收特征非常相似，在HPLC-UV分析中這種情況一般都是同分異構(gòu)體。

圖2 亮藍(lán)光譜掃描圖

（3）結(jié)構(gòu)特征。那么亮藍(lán)真的有同分異構(gòu)體嗎，亮藍(lán)的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖3，為非偶氮類酸性染料，主要有3個(gè)同分異構(gòu)體，自然界中常以 3 種同分異構(gòu)體的混合物(間位磺化物:對(duì)位磺化物:鄰位磺化物＝75～85: 15～20:0～8)形式存在，因而液相分析的時(shí)候常常得不到單一對(duì)稱的色譜峰。

圖3 亮藍(lán)結(jié)構(gòu)式

（4）定量分析。那么如何對(duì)亮藍(lán)的含量進(jìn)行定量分析是實(shí)驗(yàn)員比較關(guān)心的問(wèn)題，液相色譜定量分析的前提是先分離，嘗試對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，以減緩洗脫能力，我們發(fā)現(xiàn)這3個(gè)峰是可以實(shí)現(xiàn)基線分離的，比如圖4，圖5，不同色譜條件、不同濃度時(shí)各色譜峰面積結(jié)果以信息見(jiàn)表1。

表1 亮藍(lán)色譜峰面積

由此可以看出，不同的色譜條件，相同濃度的亮藍(lán)3個(gè)色譜峰基線分離和未分離時(shí)峰面積存在一定的差異，但是相同的色譜條件下，在2-100ppm的濃度范圍，各個(gè)亮藍(lán)的同分異構(gòu)體峰面積-濃度的線性關(guān)系較好，可能在不同的色譜條件下，亮藍(lán)的響應(yīng)情況會(huì)有稍微的差異，而在特定的色譜條件下，亮藍(lán)各個(gè)組分的同分異構(gòu)體并不會(huì)發(fā)生很大的轉(zhuǎn)變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

（1）亮藍(lán)分析時(shí)出現(xiàn)的疑似雜質(zhì)峰其實(shí)是亮藍(lán)的同分異構(gòu)體，亮藍(lán)有3種同分異構(gòu)體。

（2）實(shí)際應(yīng)用中可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模瑳Q定是否要使3個(gè)同分異構(gòu)體*分離，如果測(cè)試的是總的亮藍(lán)含量，把3個(gè)目標(biāo)峰合并在一起計(jì)算，如果是計(jì)算各個(gè)異構(gòu)體的含量就要通過(guò)調(diào)節(jié)色譜條件使其*分離后再定量計(jì)算。